ProImmune 提供无缝、高通量的核心设施服务来测量在合格的 T 细胞 ELISpot 检测中对细胞因子（如 IFN-γ、IL-2、IL-4、IL-10、IL-13、IL-17、颗粒酶 B 等）进行细胞介导的免疫。
< p>节省您在实验室中设置这些耗时的 ELISpot 检测的成本和精力。让我们经验丰富的 ELISpot CRO 团队为您提供高重复性和快速周转的工作。我们有能力以高通量格式处理一个项目中的数十到数百个样品，从而为您腾出时间进行核心工作和项目规划。依靠我们的团队，使用优化和验证实验方案，您可以避免细胞检测中变异性的陷阱，并受益于专用设施的效率和准确性。
成功的 ELISpot 检测关键取决于适当的血液采集和处理 - 我们拥有丰富的经验来帮助您获得这些关键正确的领域从早期的规划阶段到结果的评估和解释，我们都可以为您提供帮助。作为其中的一部分，我们可以为您进行血液处理，或者与第三方细胞采集和处理站点密切合作以建立一致的方案。当多个站点采集血液并分离 PBMC 时，必须使用一致的技术并及时处理细胞。在主要研究开始之前，可以在试点评估中对细胞处理、冷冻和运输程序等关键方面进行鉴定。
我们进行 ELISpot 免疫监测的经验涵盖从第一阶段到多个并行多阶段的范围。 -中心PH值ase III 临床试验每项都持续数年。因此，无论您的项目大小，与我们合作时，您都会得到正确的帮助。
主要出版物：Geletneky K. 等人，溶瘤 H-1 细小病毒显示出安全性和免疫原性活性迹象在第一个 I/IIa 期胶质母细胞瘤试验中。分子疗法 (2017) https://doi.org/10.1016/j.ymthe.2017.08.016
图 1. 来自 ProImmune 进行的 ELISpot 检测的数据。通过 IFN-γ ELISpot 测定评估 T 细胞对 H-1PV 和神经胶质瘤抗原的反应。 (A 和 B) 显示了两名接受 ParvOryx 治疗的患者通过 (A) 肿瘤内和脑内途径（患者 2-04）或 (B) 静脉内和脑内途径（患者 5-14）治疗的细胞免疫反应。在治疗前（第 0 天）或治疗后（第 10-120 天）指定的天数分离 PBMC。孵化后使用适当的刺激剂，对产生 IFN-γ 的斑点形成细胞 (SFC) 进行计数。测试兴奋剂是病毒或神经胶质瘤肽（表 S3）或全长病毒蛋白（NS1 或由 VP1 和 VP2 制成的空衣壳）。植物血凝素 (PHA) 和巨细胞病毒、EB 病毒和流感病毒 (CEF) 肽池作为阳性对照兴奋剂。阴性对照值（未刺激的细胞）范围为每百万 PBMC 0 至 21 个 SFC，并从相应的刺激样品值中减去。显示了三次重复测量的平均值（柱）和 SEM（条）。星号表示统计显着性（*p ≤ 0.05；平均 SFC − 2 SEM > 2× 阴性对照）。
如果设置正确，酶联免疫点 (ELISpot) 测定法是高度可重复且灵敏的细胞测定法，特别适合抗原特异性 CD4+ 和 CD8+ T 细胞免疫反应的高通量分析。它可以在单细胞水平上检测分泌的细胞因子，如为 100,000 个细胞中的 1 个。由于这些原因，ELISpot 现在已成为一种非常广泛使用的检测标准，用于监测 T 细胞免疫反应和验证新的 T 细胞表位。
在内部进行 ELISpot 检测，尤其是对于缺乏经验的工作人员来说，可能需要付出巨大的努力，并且可能会非常耗时且结果可变。现在，您可以依靠 ProImmune 经验丰富的团队的专业知识来节省时间和资源，并最大限度地降低风险，他们使用优化和标准化的方案以最小的变化定期执行这些测定。
多中心临床试验提出了挑战以确保一致性和可重复性的方式收集、运输和处理样品。样品的物流和制备可能是建立成功监测细胞介导的免疫反应的检测方法的最重要的步骤。我们拥有丰富的经验和能力，无论您身在北美和欧洲何处，都能收集您的样品并对其进行处理，以实现最大程度的均匀性;样品制备和运输。
我们开发了一种简化的服务，与其他商业提供商相比，使外包 ELISpot 变得快速且非常实惠。我们的检测基于简单的标准化格式，遵循以下分步流程：
(1) 客户根据 ProImmune 推荐的优化方案或优化的客户方案冷冻保存细胞。或者，ProImmune 在采血管中接收新鲜血液并进行冷冻保存
(2) ProImmune 使用我们值得信赖的托运商（客户也可以使用自己的托运商）从客户现场收集细胞，或者在 ProImmune 处理过细胞的情况下，从 ProImmune 低温储存器中检索细胞。
– 如果需要，ProImmune 可以选择进行 HLA 组织分型 – 如果需要，ProImmune 可以选择进行定制肽合成
(3) ProImmune 解冻细胞具有优化的方案，并根据一种或多种 f 进行 ELISpot 测定以下检测格式：
a.用于检测冷冻未修饰 PBMC 上 CD8+ 和 CD4+ T 细胞反应的 ELISpot 测定。 ELISpot 检测仅检测冷冻 PBMC 上的 CD4+ T 细胞反应，解冻后 CD8+ T 细胞已被耗尽。
(4) 客户收到检测报告和数据；除了全面分析之外，检测报告还包括来自自动化 ELISpot 阅读器的原始数据和图像。根据要求，这些流程可以适应任何其他或替代要求。
与许多其他 CRO 不同，ProImmune 拥有无与伦比的在测量适应性免疫反应方面拥有丰富的经验。我们还相信时间和效率至关重要，这就是为什么我们的服务旨在提供无与伦比的响应能力、毫不妥协的质量，并且比您想象的更实惠。
IFN γ T 细胞酶联免疫斑点检测的验证数据为了确保您的 ELISpot 检测始终表现良好，验证至关重要。我们为代表感到自豪我们的结果的可重复性。下面显示了我们的验证数据示例。
图 2. 低检测间变异性-ProImmune ELISpot 测定中的测定变异性。来自两名用户在三天内进行的六次 IFN gamma ELISpot 检测的标准化数据。数据显示了阳性对照和两个测试肽的响应的一致性。
ELISpot 的统计数据：Cerullo, V. et。等人。 （2010）。编码粒细胞巨噬细胞集落刺激因子的溶瘤腺病毒可诱导癌症患者的抗肿瘤免疫。癌症研究。 70：4297-4309。 [PubMedID：20484030]
患者接受了表达人粒细胞巨噬细胞集落刺激因子 (GM-CSF) 的溶瘤腺病毒治疗，该因子由病毒 E3 启动子驱动，将转基因的表达与腺病毒复制结合，从而与肿瘤环境结合。治疗前后分离患者的 PBMC，并进行干扰素-γ (IFN-gamma) ELISPOT 评估腺病毒治疗除溶瘤作用外是否还能引发肿瘤特异性反应。
23 例 PBMC提供了癌症患者的样本，ProImmune 进行了 IFN-gamma ELISPOT 测定，以确定细胞因子对 Survivin 和 HadV-5 ProMix™ 肽池的反应。 Survivin (BIRC5 PONAB)肽库由33个肽组成，HAdV-5 Penton肽库由140个肽组成；每个池中的肽长 15 个氨基酸，并有 11 个氨基酸重叠。
在 IFN-gamma ELISPOT 测定中对细胞样品进行三次重复分析，以确定其效力al 对抗原刺激作出反应。将测试孔的结果与未刺激的细胞（无肽/阴性对照）以及用植物血凝素（PHA，阳性对照）刺激的细胞的结果进行比较。如果阳性结果大于或等于阴性结果的两倍（由图表上的蓝色虚线表示），则该阳性结果被视为显着。
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图 3. 一名患者的样本结果。将测试孔的结果与未刺激的细胞（无肽/阴性对照）以及用植物血凝素（PHA，阳性对照）刺激的细胞的结果进行比较。如果阳性结果大于或等于阴性结果的两倍（由图表上的蓝色虚线表示），则该阳性结果被视为显着。
结果表明，在一些患者中，病毒治疗能够在一定程度上刺激肿瘤特异性免疫反应。这是首次在接受溶瘤腺病毒治疗的人类患者中观察到这种反应。
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